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分子雜交儀原理
分(fen)子雜交(jiao)儀又稱(cheng)分(fen)子雜交(jiao)爐和(he)分(fen)子雜交(jiao)盒,是(shi)(shi)一種通過(guo)核酸分(fen)子雜交(jiao)檢(jian)測基(ji)(ji)(ji)因組中是(shi)(shi)否存在已(yi)知基(ji)(ji)(ji)因序列的(de)(de)裝置。它(ta)廣泛(fan)應用于克(ke)隆(long)基(ji)(ji)(ji)因的(de)(de)篩選、酶切圖譜的(de)(de)制(zhi)作、基(ji)(ji)(ji)因組中特定基(ji)(ji)(ji)因序列的(de)(de)檢(jian)測和(he)遺傳疾病的(de)(de)基(ji)(ji)(ji)因診斷。
根據不(bu)同實(shi)驗(yan)的(de)(de)需要,分子雜交(jiao)儀可(ke)(ke)選用(yong)不(bu)同規(gui)格型號。攪(jiao)拌技術是現代(dai)實(shi)驗(yan)室的(de)(de)理(li)想設(she)備(bei),它可(ke)(ke)以(yi)代(dai)替塑料攪(jiao)拌袋(dai)和水(shui)浴搖瓶,避免攪(jiao)拌袋(dai)損壞(huai)帶來(lai)的(de)(de)污染(ran)風險。混合爐(lu)具有微(wei)機精確控溫(wen)、爐(lu)內空氣循環裝置設(she)計(ji)獨特、升溫(wen)速度快等特點。
它廣泛應(ying)用(yong)于克隆基因的篩選、酶(mei)切(qie)圖譜的制作、基因組(zu)中特定(ding)基因序列的定(ding)性(xing)和(he)定(ding)量檢測以及疾(ji)病的診(zhen)斷。因此(ci),它不僅在分(fen)子生物學領域,而且在臨床診(zhen)斷中有著廣泛的應(ying)用(yong)。
分子雜(za)交儀由盒(he)體、混(hun)合瓶或離心管(guan)(guan)、混(hun)合管(guan)(guan)、振動篩、隔膜、計算機控制系(xi)統等組成(cheng),如圖所示,不同(tong)類(lei)型(xing)盒(he)體所含的試(shi)管(guan)(guan)、微孔(kong)板、滑板、平板的數(shu)量(liang)也不同(tong)。
分(fen)子雜(za)交儀(yi)的原理如下(xia)
根據堿基互補配對原(yuan)理,在(zai)一定(ding)條(tiao)件下(xia),利用標記的已知DNA或RNA片段(探針)對樣(yang)品中(zhong)待測(ce)DNA序列進行(xing)檢測(ce)。
在(zai)生理條件下,DNA是(shi)一種穩(wen)定的雙(shuang)螺旋結構。在(zai)體(ti)外,當有變(bian)性(xing)因(yin)素(如溫度(du)超過(guo)65℃)℃, 胺或極端(duan)pH),DNA分子中的氫(qing)鍵斷裂(lie)并解離成(cheng)兩個(ge)單鏈(lian)DNA。這種現象稱為變(bian)性(xing)。去除(chu)變(bian)性(xing)因(yin)子后,單鏈(lian)DNA可以重組形成(cheng)穩(wen)定的雙(shuang)鏈(lian)螺旋結構。這個(ge)過(guo)程(cheng)稱為復性(xing)或退火(huo)。
在復性過程中(zhong),如果存在與部(bu)分樣本核酸(suan)序列相(xiang)同或高度同源(yuan)的(de)外源(yuan)性單鏈DNA片段或寡核苷酸(suan)(一般為17-45堿(jian)基(ji)),則二(er)者可(ke)以通過互補堿(jian)基(ji)形成(cheng)雜(za)交(jiao),即雙鏈DNA分子。這個過程叫(jiao)做雜(za)交(jiao)。當(dang)一個已(yi)知(zhi)的(de)DNA片段加入(ru)到重新折疊的(de)DNA中(zhong),如果它(ta)能結合成(cheng)一個雙鏈分子,就意(yi)味著樣品中(zhong)含有一個已(yi)知(zhi)的(de)DNA序列。